實驗鯽魚飼料中蛋白水平超過魚體最適需要量時，就會有一部分蛋白質用于提供能量而非用于生長，從而降低了蛋白質和氨基酸的利用效率，導致測定的必需氨基酸的需求量偏高，故在測定必需氨基酸需求量時，飼料蛋白水平應比實際蛋白需要量偏低，以利于其他氨基酸的利用程度達到最大。

飼料能量水平也會影響魚類的必需氨基酸需求量。必需氨基酸需求量和飼料能量水平呈正相關。也有研究認為，在比較不同魚類Arg需要量時，飼料能量水平不容忽視。因此，一些學者在研究必需氨基酸需求量時也開始考慮飼料中能量水平對研究結果的影響。

必需氨基酸之間的相互作用

從Arg的分解代謝途徑可以看出，當飼料中有鳥氨酸和瓜氨酸存在時，某些魚類可以少量合成Arg，從而使魚類對Arg的需求量降低。此外，很多魚類中還存在Lys-Arg拮抗現象。當飼料中Lys水平高于最適需求量85%時，虹鱒幼魚對Arg的需求量升高。此外，Arg替代物的差異也會影響Arg的需求量，當以谷氨酸（Glu）為Arg的等氮替代物時，斑點叉尾鮰對Arg的需求量為3.3%~3.8%（%粗蛋白），而當以甘氨酸（Gly）為其等氮替代物時，得到的Arg需求量為4.2%~5.0%（%粗蛋白），可能的原因是斑點叉尾鮰可以在體內利用Glu少量合成Arg。

此外，必需氨基酸之間的相互轉化，如Met可部分轉化為Cys，Phe可部分轉化為Tyr，Trp可轉化為煙酸等也是導致魚類的必需氨基酸需求量產生差異的主要原因。

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